CONTROLE DE QUALIDADE DOS REAGENTES DE IMUNO-HEMATOLOGIA - PARÂMETROS RECOMENDADOS
A.Inspeção dos reagentes:
| Parâmetros | Especificações | Frequência |
| Avaliação do rótulo | Nome do fabricante, nome e origem do produto, data de validade, | A cada lote/remessa |
| número do lote, volume, temperatura de estocagem, número de registro na ANVISA, firmemente afixado ao frasco e que permita a inspeção visual do conteúdo. | ||
| Avaliação das instruções de uso | Nome e composição do reagente, descrição dos procedimentos técnicos, informações claras e legíveis e em português. | A cada lote/remessa |
| Avaliação da embalagem / frasco | Embalagem íntegra e bem vedada e frascos conta-gotas transparentes. | A cada lote/remessa |
B. Inspeção visual dos reagentes
| Reagentes | Especificações | Frequência |
| Antissoros, potencializadores, soluções e enzimas proteolíticas | Ausência de precipitados, gelatina, partículas, fungos, turvação e hemólise. | Diária |
| Reagentes de hemácias | Ausência de hemólise, turvação do líquido sobrenadante ou escurecimento da hemácia. | Diária |
C - Inspeção laboratorial dos reagentes: Hemácias "A" e "B"
| Parâmetros | Especificações | Frequência |
| Potência: intensidade de aglutinação | Pode ser avaliada pela intensidade de aglutinação obtida com plas- mas ou soros que possuam os anticorpos complementares aos an- tígenos presentes nas hemácias | A cada lote/remessa |
| testadas. Testar hemácias "A" (suspensão a 3-5%) com plasma "B" e hemácias "B" (suspensão a 3-5%) com plasma "A". A intensidade mínima de aglutinação obtida | ||
| para qualificar o reagente de hemácias é de 2+. Não deve ocorrer a formação de empilhamento ("rouleaux"). | ||
| Especificidade | Pode ser avaliada pela capacidade do anticorpo reconhecer apenas seus antígenos eritrocitários complementares. Testar hemácias "A" e "B" (suspensão a 3-5%) | A cada lote/remessa |
| com plasmas "AB". Não deve haver aglutinação, visto que não há anticorpo específico para promovê-la no teste | ||
| realizado. Não deve ocorrer a formação de empilhamento ("rou- leaux"). |
D - Inspeção laboratorial dos reagentes: Antissoros anti-A, -B e -AB
| Parâmetros | Especificações | Frequência |
| Potência: intensidade de aglutinação | Deve ser avaliada por meio da intensidade da aglutinação do soro não diluído com hemácia contendo o antígeno | A cada lote/remessa |
| correspondente. Testar os soros anti-A, -B, -AB com hemácias (suspensão a 3-5%) que contenham os antígenos correspondentes. Ver padrão de avaliação dos resultados no | ||
| quadro D.1. | ||
| Potência: título | É determinado utilizando diluições em série dos antissoros (1/1 até 1/2048) colocando-os em contato com hemácias que contenham os antígenos correspondentes | A cada lote/remessa |
| Testar os soros anti-A, -B, -AB com hemácias (suspensão a 3-5%) que contenham os antígenos correspondentes. Ver padrão de avaliação dos resultados no | ||
| quadro D.1. | ||
| Potência: avidez | É avaliada pela medida do tempo entre a adição do soro e hemácias testes e a identificação macroscópica inicial da aglutinação. Testar os soros anti-A, -B, -AB | A cada lote/remessa |
| com hemácias (suspensão a 10-20%) que contenham os antígenos correspondentes. Ver padrão de avaliação dos resultados no quadro D.1. | ||
| Especificidade | Pode ser avaliada pela capacidade do anticorpo reconhecer apenas seus antígenos eritrocitários complementares. Testar os soros anti-A, - B e -AB com hemácias "O" | A cada lote/remessa |
| (suspensão a 3-5%). Não deve haver aglutinação, visto que não há antígeno específico para promovê-la nos testes realizados. |
D.1. Parâmetros de Intensidade de aglutinação e título esperados para os antissoros anti-A, -B e -AB
| Antissoro | Reagentes de hemácias utilizados* | Intensidade mínima de aglutinação sem diluição do antissoro | Avidez (suspensão de hemácias a 20%) | Título |
| Anti-A | A1 | 3+ | até 15'' | 256 |
| Cor: Azul | ||||
| A2 | 2+ | até 30'' | 128 | |
| A1B | 3+ | até 30'' | 128 | |
| A2B | 2+ | até 45'' | 64 | |
| Anti-B | B | 3+ | até 15'' | 256 |
| Cor: Amarela | ||||
| A1B | 3+ | até 15'' | 256 | |
| Anti-AB | A1 | 3+ | até 15'' | 256 |
| Cor: Incolor | ||||
| A1B | 3+ | até 15'' | 256 | |
| B | 3+ | até 15'' | 256 | |
| A2 | 3+ | até 30'' | 128 |
* no mínimo 3 hemácias de cada fenótipo.
E. Inspeção laboratorial dos reagentes: Antissoros anti-RhD
| Parâmetros | Especificações | Frequência |
| Potência: intensidade de aglutinação | Pode ser avaliada por meio da intensidade de aglutinação do soro não di- luído com hemácias contendo os antígenos correspondentes. Testar o | A cada lote/remessa |
| soro anti-RhD com hemácias "O" positivo (suspensão 3-5%). Ver padrão de avaliação dos resultados no quadro E. 1 | ||
| Potência: título | É determinado por meio de diluições em série dos antissoros(1/1 até 1/2048) colocando-os em contato com hemácias que contenham os antí- genos correspondentes. Testar os soros anti | A cada lote/remessa |
| RhD com hemácias "O" positivo (suspensão a 3-5%). Ver padrão de avaliação dos resultados no quadro E. 1 | ||
| Potência: avidez | É avaliada pela medida do tempo entre a adição do soro e hemácias testes e a identificação macroscópica inicial da aglutinação. Testar os soros antiRhD com hemácias "O" positivo | A cada lote/remessa |
| (suspensão a 40-50%). Ver padrão de avaliação dos resultados no quadro E. 1. | ||
| Especificidade | Pode ser avaliada pela capacidade do anticorpo reconhecer apenas seus an- tígenos eritrocitários complementares. Testar os soros anti-RhD com hemá- cias "O" RhD negativo (suspensão a 3- | A cada lote/remessa |
| 5%). Não deve haver aglutinação, visto que não há antígeno específico para promovê-la nos testes realizados. |
E.1. Parâmetros de intensidade de aglutinação e título esperados para os antissoros anti-RhD
| Antissoro | Fenótipos das hemácias utilizados | Intensidade mínima de aglutinação sem diluição | Avidez (suspensão de hemácias a 40- 50%) | Título | |
| Anti-RhD | "O" R0r (Dccee) | 3+ | até 30'' | 32 | |
| Cor: incolor | |||||
| "O" R1r (DCcee) | 3+ | até 30'' | 32 | ||
| "O" R2r (DccEe) | 3+ | até 30'' | 32 |
*Deve-se utilizar no mínimo 3 hemácias de cada fenótipo
F. Inspeção laboratorial dos reagentes: Antiglobulina Humana (AGH)
| Parâmetros | Especificações | Frequência |
| Potência: intensidade de aglutinação | Pode ser avaliada pela intensidade da aglutinação da AGH com hemácias RhD positivas (preferencialmente R0r Dccee) sensibilizadas com anticorpos da classe IgG após adsorção (plasma | a cada lote/remessa |
| humano com anti-RhD ou soro comercial anti-RhD policlonal).Testar a AGH realizando o teste de antiglobulina direto (Coombs direto) com as | ||
| hemácias sensibilizadas "O" RhD positivo (suspensão a 3-5%). A intensidade mínima de aglutinação esperada é de 3+ | ||
| Especificidade | O antissoro não deve reagir com hemácias que não estejam sensibilizadas com anticorpos IgG e/ou complemento. Testar a AGH realizando o teste de antiglobulina direto (Coombs direto) com 3 | a cada lote/remessa |
| hemácias distintas (suspensão a 3-5%) não sensibilizadas. Não deve haver aglutinação ou hemólise. |
G. Inspeção laboratorial dos reagentes: Salina, LISS, albumina bovina e enzimas proteolíticas
| Reagentes | Especificações | Frequência |
| Salina | Não pode promover hemólise e aglutinação de hemácias não sensibilizadas nos testes imuno-hematológicos. Estas características deverão ser observadas quando este reagente estiver em uso. | diária |
| Verificar pH cujos valores permitidos são de 6,0 a 8,0 | a cada lote/remessa diária | |
| LISS | Não pode promover hemólise e aglutinação de hemácias não sensibilizadas nos testes imuno-hematológicos. Estas características deve- rão ser observadas quando este reagente estiver em uso. | |
| Verificar pH cujos valores permitidos são de 6,5 a 7,0 | a cada lote/remessa |
H. Inspeção visual das colunas de aglutinação:
| Indicadores | Especificações | Frequência |
| Microtubos com gel ou pérolas | Totalmente sedimentados, aspecto homogêneo e solução tampão acima da coluna. Não devem apresentar sinais de ressecamento, partículas em suspensão e bolhas de ar. O nível do gel ou das | diária |
| pérolas em todos os microtubos deve ser de 2/3. O nível do tampão deve estar entre 1 a 2 mm acima do gel ou pérola de vidro. | ||
| Lacres de alumínio | Sem perfurações ou irregularidades. Na retirada do lacre é preciso observar, na parte inferior da folha de alumínio, as marcas impressas das bordas dos | diária |
| orifícios dos microtubos que indicam o fechamento correto. |
Observações:
1) todos os testes de controle de qualidade de reagentes devem ser registrados em formulários específicos. Estes devem informar o nome do reagente, fabricante, lote, validade, resultados dos testes e responsável pela execução do teste;
2) os reagentes que estiverem fora das especificações técnicas descritas acima não devem ser utilizados na rotina. Registrar as não conformidades e investigar as causas das inadequações; e
3) recomenda-se que serviços de hemoterapia que utilizarem outros reagentes elaborem procedimentos de controle de qualidade, porém sem caráter obrigatório.